新闻&促销

当前位置:首页> 新闻&促销

开学有礼 | ELISA实验又失败,问题出在哪?

2018年09月04日-2018年11月11日

摘要:

大师姐:“你这次ELISA实验又失败了?新学期已经到了,你再不努力就要被新来的小鲜肉们赶超了!”

小师弟:“大师姐,这真的不怪我,你看我的实验步骤也没有问题啊,为什么我的检测数据和文献中的实验结果差别这么大!”

大师姐:“哎,这着实令人头大!我们去问问看ELISA专家们是怎么说的。”

实验结果.jpg

大师姐请到了博士德有多年ELISA实验经验的专家,结合小师弟实验中的实际情况,分析如下:引起ELISA测定结果与文献报导不一致的原因主要有三点:试剂因素、标本因素和操作因素。

实验结果不一致的原因.jpg

1. 试剂因素

试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。

不同厂家的试剂一定不能混用,包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异,还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。如:有的厂家酶标板孔间CV值大于20%,标记酶的活性及显色液的稳定性比较差,使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。

要注意试剂的批号和出厂日期,虽然试剂的有效期多为1年,最好选择刚出厂的试剂盒。

避免选择假的ELISA试剂盒。有些厂家为夸大生产ELISA的指标范围,用一种指标来冒充其它指标,造成各种种属、各种指标都可以做的假象。比如用TGF beta这样的指标代替大多数试剂盒的其它指标作为检测抗体,同样可以获得良好的标准曲线。因为TGF beta在大多数哺乳动物中(human, mouse, rat, pig, bovine, etc.)都有广泛表达,种属间的氨基酸序列同源性达100%,TGF beta 随着其他因子的影响,其表达水平也会发生相应的变化,使得实验者难以查觉。

在分析完可能出现的因素后,专家给到以下鉴别方法,大家可以直接去丁香园搜索“如何鉴别真假ELISA试剂盒”

1.利用干扰实验可辨别ELISA试剂盒是否检测目的抗原。

2.如果购买了同一公司的ELISA试剂盒A和B,利用交叉实验可辨别ELISA试剂盒真伪。

3.指标本身也可以鉴定试剂盒的真伪。


2.标本因素和操作因素

血清是最常用的ELISA标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种:

内源性物质.jpg

有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。

 外源性物质.jpg

    外源性物质常常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。

    所以,当ELISA测定结果与预期或文献报导中不一致时,应该首先考虑试剂因素,这个是做好实验获得正确数据的前提保证,其次还有标本因素和操作因素等多方面进行分析,并应采取相应措施排除干扰作用,从而为实验提供正确可靠的检测结果。

    聆听了专家的分析后,小师弟赶紧回想了一下自己的实验过程,确实出现了专家列举的一些情况,马上调整重做,终于达到了预期的实验结果。

    又到一年开学季,小师弟毫无保留的将精华转述给大家的同时,也奉上了博士德生物特别准备的开学关注礼、分享礼、抽奖礼!

 网站广告图x.jpg

奖品全.jpg

     还等什么?手机转发起来,好礼多多,先到先得,送完为止!领奖领到手软!



   

博士德生物

25年只研发了20000多种抗体

25年却收获了40000多篇引用文章


25年只研发了1000多种精品Elisa

25年却服务了10000多所全球院校和医院


25年销售了一百多万支抗体

25年却没有一份假货投诉或曝光


拒绝假货,追求探索的快乐

拒绝应付,追求卓越的科研


原谅我们

从不随大流


博士德期待

与坚持探索的你

共同创造科研的崇高价值!


博士德出品 · 必属精品